KIP-Veröffentlichungen

Jahr 2013
Autor(en) Jens Rößler
Titel Signal-Charakterisierung spezifischer her2/neu-Signale der kombinatorischen Oligonucleotid Fluoreszenz in situ Hybridisierung (COMBO-FISH)
KIP-Nummer HD-KIP 13-95
KIP-Gruppe(n) F18
Dokumentart Masterarbeit
Abstract (de)

Brustkrebs ist mit 72.000 Neuerkrankungen pro Jahr die häugste Krebsart bei Frauen. 20-30% der Brustkrebserkrankungen können auf eine Amplikation des Protoonkogens her2/neu zurückgeführt werden. Dies korreliert mit einer schlechteren Überlebenschance. Der Amplikationsstatus von her2/neu spielt dabei eine wichtige Rolle in der Therapiendung.
Eine methodische Weiterentwicklung der Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH), die kombinatorische Oligonucleotid FISH (COMBO-FISH), erlaubt durch eine Zusammenlagerung mehrerer uoreszenzmarkierter Oligonucleotide eine präzisere Markierung der Genloci als eine konventionelle FISH mit BAC-Sonden. Durch diese präzise Markierung mit COMBO-FISH kann der Amplikationsstatus ausgewertet und genauer bestimmt werden.
In dieser Arbeit wurden wichtige Grundlagen gelegt, die eine automatische Auswertung einer solche COMBO-FISH-Untersuchung ermöglichen. Dazu wurden spezische her2/neu-COMBO-FISH-Signale von Sondensets mit Pseudpeptid- (PNA) und Desoxyribose-Rückgrat (DNA) analysiert und charakterisiert.
Die verwendeten Sonden zeigten Hybridisierungsezienzen von 16.66  0.83% für das PNA-Sondenset und 18.22  2.7 % für das DNA-Sondenset. Durch eine zusätzliche Behandlung der hybridisierten Präparaten mit primären Antikörpern konnte eine deutliche Verbesserung des Signal/Hintergrund-Verhältnisses um 90.9  10.6 % von 2.53  0.05 auf 4.83  0.25 und somit eine verbesserte Detektierbarkeit der Signale erreicht werden.
Es konnten weiterhin Referenzwerte für die Ausdehnung typischer her2/neu-COMBOFISH-Signale etabliert werden, die eine automatische Signalerkennung präzisieren und verbessern können.
Eine Markierung von her2/neu mit COMBO-FISH könnte in Zukunft die präzise Auszählung des Amplikationsstatus und damit eine verbesserten, angepassten Therapie ermöglichen.

Abstract (en)

With 72.000 incidences per year, breast cancer is the most common cancer type found in women. Approximatley 20-30% of breast cancer incindences show an amplication of the protooncogen her2/neu, which correlates with a poor survival chance. The amplicationstatus of her2/neu plays an important role in nding the right therapy.
A methodical modication of the uorescence in situ hybridization (FISH), the combinatorial oligonucleotide FISH (COMBO-FISH), uses a clustering of multiple uorescencelabelled oligonucleotides to create a specic uorescence-signal in the genelocus of interest. COMBO-FISH therefore allows a more precise labelling of geneloci than a conventional FISH using BAC-probes. By means of this precise COMBO-FISH-labelling, the amplicationstatus of her2/neu can be analyzed and evaluated in a more precise manner.
For the development of an automatic evaluation of such a COMBO-FISH, specic her2/neu-COMBO-FISH-signals of dierent probes with pseudopeptide- (PNA) and desoxyribose-backbones (DNA) have been analyzed and characterized. The PNA-Probe showed a hybridization eciency of 16.66  0.83%, while the DNA-Probe showed an eciency of 18.22  2.7 %. By treating the hybridized specimen with primary Antibodies, the signal/noise-ratio could be increased signicantly by 90.9  10.6% from 2.53 
0.05 to 4.83  0.25, leading to an improved detectability. Furthermore reference values for the volume of typical her2/neu-COMBO-FISH-signals could be established, leading to an improved automatic signal detection.
Labelling her2/neu with COMBO-FISH could allow a future precise enumeration of the her2/neu-amplicationstatus and therefore lead to an improved therapy.

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